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濃縮膠和分離膠的PH值不同

濃縮膠和分離膠的PH值不同,前者主要表現(xiàn)為濃縮效用,后者表現(xiàn)為電荷效用和分子篩效用。
濃縮效應(yīng)主要在濃縮膠中完成,濃縮膠的pH6.8,在這個(gè)pH條件下,緩沖液中的HCl的Cl離子幾乎全部解離,Gly的等電點(diǎn)為6.0,僅少數(shù)解離為負(fù)離子,在電場中移動(dòng)速度很慢。酸性蛋白質(zhì)在此pH下解離為負(fù)離子,三類離子的遷移速率為Cl>一般蛋白質(zhì)>Gly,電泳開始后,Cl離子泳動(dòng)快,在其后留下一個(gè)低離子濃度區(qū)。Gly在電場中移動(dòng)很慢,造成移動(dòng)離子的缺乏,于是快慢離子間就形成了一個(gè)缺少離子的高壓區(qū),在高壓區(qū)內(nèi)所有的負(fù)離子都會(huì)加速移動(dòng),當(dāng)移到Cl離子區(qū)域時(shí),高電壓消失,蛋白質(zhì)的移動(dòng)速度慢下來,當(dāng)以上穩(wěn)定狀態(tài)建立后,蛋白質(zhì)樣品在快慢離子間被濃縮形成一個(gè)狹小的之間層,并按蛋白質(zhì)所帶負(fù)電荷量的多少依次排列成帶,濃縮樣品,從濃縮膠進(jìn)入分離膠后,膠的pH升高,Gly的離解度增大,泳動(dòng)率上升,又因?yàn)樗肿有。食^所有的蛋白質(zhì)分子,緊跟在Cl離子后,Cl離子遷移后,低離子濃度不再存在,形成了恒定的電場強(qiáng)度,因此,蛋白質(zhì)樣品在分離膠中的分離主要取決于它的電荷性質(zhì),分子大小和形狀,分離膠的孔徑有一定大小,對(duì)不同相對(duì)質(zhì)量的蛋白質(zhì)來說,通過時(shí)收到的滯阻作用不同,即使靜電荷相等的顆粒,也會(huì)由于這種分子篩的效應(yīng),把不同大小的蛋白質(zhì)相互分開。
· 濃縮膠的濃度小,起到濃縮的作用,**濃縮膠和分離膠的界面。
而后,分離膠濃度大,起分離的作用。
 
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