1儀器與試藥
TU一1901雙光束紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)，數(shù)顯
恒溫水浴鍋(北京市長風(fēng)儀器儀表公司)，TB一215D型電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)，LD-02型二兩裝高速中藥粉碎機(中G溫嶺市大海藥材器械廠)，RE一52A型
旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(
上海亞榮生化儀器廠)；麥冬果實采于濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院日照校區(qū)，經(jīng)濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院生藥學(xué)教研室鑒定為百合科植物麥冬(Ophiopogonjaponicus(Thunb)Ker—Gawl)的果實，對照品薯蕷皂苷元來源于江蘇省中G科學(xué)院植物研究所藥用植物研究中心，5％香草醛溶液(0．59香草醛溶于10mL冰醋酸；新鮮配制)，其他試劑均為分析純。
2實驗與方法
2．1對照品溶液的制備
精密稱取干燥**恒重的薯蕷皂苷元對照品
15．00rag，加適量甲醇溶解，置于10mL容量瓶中，用甲醇定容**刻度，搖勻。精密吸取1．0mL置于100mL容量瓶中，用甲醇定容**刻度，搖勻，制備成濃度為15／-g／mL的對照品溶液，備用。
2．2供試品溶液的制備
稱取干燥的麥冬果實粉末2．59，置于100mL圓底燒瓶中，加入50mL 70％乙醇，于90℃水浴中回流提取2h，提取2次，抽濾，濾液減壓濃縮得浸膏。將浸膏用適量水溶解，依次用氯仿、水飽和正丁醇萃取3次，合并正丁醇萃取液，減壓濃縮得總皂苷浸膏。向總皂苷浸膏中加入25mL 15％的硫酸溶液，于沸水浴中回流水解3h，冷卻**室溫，轉(zhuǎn)移**分液漏斗中，用氯仿萃取3次，合并氯仿萃取液，濃縮得總皂苷元浸膏。將總皂苷元浸膏用甲醇溶解，定容**100mL，得供試品溶液，備用。
2．3測定波長的選擇
分別精密吸取對照品溶液、樣品溶液各1．0mL，置于10mL具塞試管中，揮盡溶劑，分別加入5％香草醛溶液0．2mL和高氯酸0．8mL，于70℃水浴上不蜥振搖保溫20min，冰浴冷卻，加冰醋酸稀釋**刻度，立即在紫外分光光度計于200～900nm區(qū)間掃描，同時空白溶液作參比。對照品及供試品的**大吸收波長均在453nm，因此選取453nm作為檢測波長。
2．4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
分別精密吸取對照品溶液1．5，2．0，3．0，4．0，
5．OraL，置于5個10mL具塞試管中，揮盡溶劑，分別加入5％香草醛溶液0．2mL和高氯酸0．8mL，置70℃水浴上不斷振搖保溫20min，冰浴冷卻，加冰醋酸稀釋**刻度，搖勻，備用。以5％香草醛溶液0．2mL和高氯酸0．8mL，加冰醋酸稀釋**刻度的溶液為空白，在453nm處測定吸收度。以濃度C(t-g／mL)為橫坐標(biāo)，吸收度A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)
準(zhǔn)曲線。經(jīng)線性回歸分析處理得到回歸方程為：A一0．0492C+0．044(r=0．999)。
說明吸光度與對照品濃度在2．25弘g／mL～7．5／-g／mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
2．5精密度試驗
精密吸取對照品溶液2．OraL**lOmL具塞試管中，按“2．4”項下方法顯色測定吸收度，連續(xù)測定5次，結(jié)果RSD為0．093％，可見儀器精密度良好。
2．6穩(wěn)定性試驗
精密吸取對照品溶液5．OmL，置lOmL具塞試管中，按“2．4”項下方法顯色，并分別在顯色后的0，5，10，15，20min測定其吸光度，結(jié)果RSD為0．454％，可見本法在顯色后20 min內(nèi)，吸光度值是比較穩(wěn)定的，測定**好在20min內(nèi)完成。
2．7重現(xiàn)性試驗
取藥材粉末5份，每份約2．59，按照“2．2樣品溶液的制備”步驟，平行制備樣品溶液，各吸取1．0mL**5個10mL具塞試管中，按“2．4”項下方法顯色測定吸收度，結(jié)果樣品中總皂苷元平均含量為0．24％，RSD為0．4％。表明方法重現(xiàn)性良好。
2．8加樣回收率試驗
取已知含量的藥材粉末6份，每份約0．59，分別加入1．5mg／mL的對照品溶液0．8mL，按照“2．2樣品溶液的制備”步驟，平行制備樣品溶液，各精密吸取樣品溶液2．0mL置于6個10mL具塞試管中，按“2．4”項下方法顯色測定吸收度，結(jié)果見表1。
2．9樣品含量測定
分別取采集于向陽山坡地、樓后背陰處的兩批藥材2．59，依“2．2”項下方法制備供試品溶液，各精密吸取1．OmL，依“2．4”項下方法顯色測定吸收度，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線公式，計算其總皂苷元平均含量分別為0．24％、0．29％。
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